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PCR篇-耗材選擇
發(fā)布日期:2022/10/18 9:56:38
PCR 耗材為什么一般都是PP材質(zhì)的呢?
因?yàn)镻CR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸,而聚丙烯(PP)材質(zhì)是生物學(xué)惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有著良好的化學(xué)耐性,及溫度耐受性(可以121℃ 高壓滅菌,也可以承受熱循環(huán)過程中的溫度變化)。
不同體積的PCR管/板,我該怎么選呢?
選擇宗旨:依據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求選用合適的產(chǎn)品。PCR管的體積大多數(shù)都可以滿足PCR反應(yīng)的要求。在此基礎(chǔ)上,推薦優(yōu)先選用低容管。因?yàn)榈腿莘磻?yīng)管/板有著較小的上方空間,可提高熱傳導(dǎo)率并降低蒸發(fā)。同時,在加樣時需要避免加樣過量或過少。過量會導(dǎo)致熱傳導(dǎo)率下降,溢出及交叉污染,而過少可能會造成樣品蒸發(fā)損失。
常見反應(yīng)管的規(guī)格及體積:
單管/聯(lián)管:0.5mL,0.2mL,0.15mL
96孔板:0.2mL,0.15mL
384孔板:0.04mL

樣品量較少時,我會選單管或者聯(lián)管,但是為什么有的是平蓋,有的是凸蓋呢?

當(dāng)樣品量較少時,都會優(yōu)先選用單管或者聯(lián)管。但是當(dāng)反應(yīng)體積需求較大時,單管占優(yōu)勢,體積可達(dá)0.5mL。而平蓋和凸蓋各有優(yōu)點(diǎn),具體可參考下面的信息。

不同顏色的PCR管/板,我該怎么選呢?
對于普通的PCR反應(yīng)選用透明或者彩色的PCR管都是可以的,而彩色透明的PCR管更有助于進(jìn)行樣品分類管理。
但qPCR更推薦選用優(yōu)質(zhì)的白色PCR耗材。由于qPCR需要實(shí)時定量檢測熒光信號強(qiáng)度,更需要靈敏、精確的熒光信號傳遞。實(shí)驗(yàn)證明,與傳統(tǒng)的透明PCR產(chǎn)品相比,白色PCR產(chǎn)品可最大程度地反射熒光信號,減少孔間信號交叉污染,可優(yōu)化實(shí)時熒光定量PCR的結(jié)果。

我之前買的PCR板/管材質(zhì)厚度不一,是不是厚點(diǎn)的穩(wěn)定性更好呢?
不是的,管壁厚度會直接影響熱傳導(dǎo)率,極薄的壁厚可優(yōu)化熱傳遞減少循環(huán)時間。要想提升PCR反應(yīng)效率,保證反應(yīng)穩(wěn)定高效進(jìn)行,均一、超壁薄的PCR耗材才是不二之選。
對于96孔或者384孔板,為什么有的有裙邊,有的沒有呢?
其實(shí)PCR/qPCR板的裙邊是為了更好地適應(yīng)自動化應(yīng)用,可為儀器提供穩(wěn)定的支持和機(jī)械耐受強(qiáng)度,且移液過程中的穩(wěn)定性也會更高。
PCR板一般分為無裙邊、半裙邊、全裙邊。
無裙邊板:可適用于大多數(shù)的PCR儀或qPCR儀,但不適用于自動化應(yīng)用。移液過程中穩(wěn)定性不高,需要配合板托使用。
半裙邊板:可適配標(biāo)簽或應(yīng)用條碼,及自動化應(yīng)用,且有著較好的移液穩(wěn)定性。
全裙邊板:非常適用于自動化實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,也可適配標(biāo)簽及應(yīng)用條碼。機(jī)械強(qiáng)度較好,可適用于凸出模塊的PCR儀,且移液過程中穩(wěn)定性高。
對于96孔或者384孔板,為什么切角和標(biāo)識都不是很相同呢?
這是由切角和標(biāo)識的作用決定的。
切角:PCR板的切角位置選擇取決于適配儀器要求,便于定位。

標(biāo)識:PCR板的數(shù)字字母標(biāo)記有助于識別單個孔及樣品位置。一般為凸出的顏色數(shù)字標(biāo)識或者印刻標(biāo)識。對于一些自動化應(yīng)用實(shí)驗(yàn),印刻標(biāo)記的反應(yīng)板密封性會更好。

為什么有的PCR板孔是凸出的,有的卻是平的呢,哪個更好?
適合的才是最好的。常見的PCR板有平孔緣和加高孔緣兩種。
平孔緣的反應(yīng)板,可適用于大多數(shù)的PCR儀。
升孔緣的反應(yīng)板,便于封膜,可降低樣品間的交叉污染風(fēng)險。

PCR封板膜有好多種類型,哪種實(shí)驗(yàn)效果更好呢?
根據(jù)具體的PCR實(shí)驗(yàn)要求選用適配的高質(zhì)量封板膜,不僅能有效地保護(hù)樣品,防止污染,還可以提供可信賴的實(shí)驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)。

提供溫度耐受性和密封性強(qiáng)、高透明度、操作簡便的高質(zhì)量PCR/qPCR膜。

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